SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳说明书

             SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（血红蛋白的分离试剂盒）
产品简介：
在本试剂盒中，聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(简称 Acr)单体和少量交联剂甲叉
双丙烯酰胺(简称 Bis)通过化学催化剂(过硫酸铵)、四甲基乙二胺(TEMED)作为加速
剂形成三维空间的高聚物。SDS 能够使蛋白质复合体解离，并能够去除蛋白质所带
电荷对其迁移率的影响，从而使蛋白质迁移率*反映出单条肽链的分子量大小。
蛋白样品可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到分离，并能根据蛋白质条带的位置确定
其分子量。本试剂盒具有方便，快捷的特点。
试剂盒规格：
8cm×7cm×1mm 厚的凝胶 3 块。
试剂盒内容：

操作步骤：
1. 打开试剂盒，依照说明书清点各种试剂；
2. 配制 30%的丙烯酰胺混合液：将试剂盒中提供的 Acr 与 Bis 固体混合物加
蒸馏水 10mL，混匀后，在冰箱中 4℃避光保存；
3. 配制 10%SDS：将试剂盒中提供的 SDS 固体加 1mL 蒸馏水；
4. 配制 10%过硫酸铵溶液（现配现用）：将试剂盒中提供的过硫酸铵固体加
蒸馏水 1mL，混匀后，在冰箱中 4℃保存；
5. 配制电泳缓冲液：将试剂盒中提供的 Tris-甘氨酸混合物加蒸馏水至 1500
mL 混匀；
6. 配制脱色液：在 500 mL 蒸馏水中依次加入甲醇 400mL，乙酸 100mL；
7. 配制染色液：将试剂盒中提供的染料固体(考马斯亮蓝 G250)加入 200mL
脱色液中混匀，滤纸过滤；

* 配置好的染色液可反复使用。
8. 分离胶配置（配制 1 块胶用量）：在烧杯中依次加入水 1.6mL，30%的丙烯
酰胺混合液 2.0mL，1.5mol/LTris 溶液(pH8.8)1.3mL，10%的 SDS 50μL，10%过硫
酸铵 50μL，TEMED 2μL；
9. 浓缩胶配置（配制 1 块胶用量）：在烧杯中依次加入水 2.1mL，30%的丙烯
酰胺混合液 0.5mL，1.0mol/LTris 溶液(pH6.8)0.38mL，10%的 SDS 30μL，10%过硫
酸铵 30μL，TEMED 3μL；
10. 样品制备：10μL 的蛋白样品与 10μL 的 2×加样缓冲液混匀后，至于沸水中
5～10 分钟，加入点样孔进行电泳；
11. 实验操作详见人教社生物技术实践（选修一）光盘中的《血红蛋白的提取和分
离》部分。

储存条件：
本试剂盒置于 4℃冰箱保存 3 个月。（注：2×加样缓冲液需要放在-20℃保存。）