运行ABI7500实时荧光定量pcr仪需要注意些什么？

使用ABI 7500实时荧光定量PCR仪时，需注意以下关键事项以确保实验的准确性和设备的安全运行：

一、abi7500 pcr实验前准备

1、样本与试剂

使用高质量、无污染的DNA/RNA模板和试剂（如引物、探针、Master Mix）。

避免试剂反复冻融，分装保存以减少降解风险。

对RNA样本进行DNase处理，并确保cDNA合成质量。

2、耗材选择

使用光学级八联管或96孔板，确保与仪器适配（如ABI认证耗材）。

检查管盖是否密封，避免蒸发污染或信号干扰。

3、实验设计

设置阴性对照（无模板对照，NTC）和阳性对照，监测污染和扩增效率。

合理设计复孔（建议至少3个技术重复）以提高数据可靠性。

二、abi7500 pcr操作注意事项

1、校准与维护

定期进行 ROX校准（针对染料校正）和 光学校准（确保荧光信号稳定性）。

清洁样品槽和光学部件，避免灰尘或污染物干扰荧光检测。

2、程序设置

确认反应程序（变性、退火、延伸温度和时间）与引物/探针匹配。

设置正确的荧光通道（如FAM、VIC、ROX等），避免信号串扰。

3、加样与上机

加样时避免气泡（可能影响荧光读取），离心后再上机。

确保反应板/管在样品槽中放置平整，避免孔位偏移。

三、数据分析与质控

1、基线阈值设置

手动调整基线（Baseline）和阈值（Threshold），确保Ct值准确。

检查扩增曲线是否平滑，排除异常孔（如起峰过早或非特异性扩增）。

2、熔解曲线分析（若适用）

确认单峰特异性，多峰可能提示引物二聚体或污染。

3、效率评估

标准曲线斜率应在 -3.1~-3.6 之间（对应扩增效率90%~110%）。

四、安全与维护

1、防污染措施

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

定期用10%漂白剂或乙醇清洁工作台。

2、仪器保养

关机前清洁样品槽，定期联系工程师进行专业维护。

避免长时间连续运行，防止过热。

通过严格遵循上述步骤，可减少实验误差，确保荧光定量PCR结果的可靠性和重复性。如遇异常问题，建议参考仪器手册或联系ABI技术支持。