ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种广泛应用于生物学、医学和农业等领域中的免疫分析技术。它通过抗原或抗体与固相载体的结合,以及酶标记物的催化反应,实现对特定分子的检测和定量。
基本原理:
ELISA利用抗原或抗体的特异性结合,将它们固定在固相载体上(如96孔板),然后通过酶标记的抗体与底物反应产生可检测信号。这种方法可以实现对微量物质的高灵敏度和高特异性检测。
ELISA(酶联免疫吸附测定)实验中,三个关键的必要试剂:
1. 包被抗体/抗原:这是试剂盒的“灵魂”所在。它们预先被固定在96孔板内壁上,用作捕获目标抗原或抗体的锚点。这些抗原或抗体能够特异性地结合样品中的目标分子。
2. 酶标记抗体:这个试剂是实现高灵敏度检测的关键。它结合了高度特异性的抗体与具有催化活性的酶,如辣根过氧化物酶(HRP)。当酶标记抗体与孔板上的抗原或抗体结合后,酶会催化底物发生化学反应,产生显色产物,从而实现信号放大和检测。
3. 底物溶液:底物是酶的反应物,本身无色,但在酶的作用下会发生化学变化,生成有色产物。这个显色反应的深度与样品中目标分子的浓度成正比,因此通过测量显色的深浅,可以定量分析目标分子的含量。常用的底物包括TMB(四甲基联苯胺)和ABTS(2,2'联氮双(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)),它们在催化后会形成蓝色或橙黄色产物。
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