ELISA（酶联免疫吸附测定）样本不显色解读

ELISA（酶联免疫吸附测定）中，如果标准品显色但样本不显色，可能由以下几个原因造成：

1. 样本保存或处理不当：如果样本在保存或处理过程中发生了降解，或者样本中待检测的抗原浓度过低，都可能导致样本不显色。

2. 抗体特异性或浓度问题：使用的捕获抗体和检测抗体可能与样本中的抗原不匹配，或者抗体浓度不足，导致特异性结合不充分。

3. 孵育条件不适宜：孵育温度、时间或缓冲液条件不适当，可能影响抗原抗体的结合效率。

4. 封闭不充分或封闭液问题：封闭步骤如果未充分进行，可能会导致非特异性结合增加，从而掩盖了特异性信号。

5. 显色时间不足：标准品显色时间可能比样本所需时间长，如果样本孔的显色时间不够，也可能导致不显色。

6. 终止液问题：加入终止液后，如果终止液不正确，可能提前终止了显色反应，导致样本孔不显色。

7. 显色剂保存不当：如果显色剂如TMB在使用前已经变色或氧化，会影响最终的显色效果。

8. 仪器读数问题：酶标仪的波长设置、滤光片选择或仪器本身的问题，可能影响到样本孔的读数。

解决方法：

1. 检查样本保存和处理过程，确保样本未降解且抗原浓度足够。

2. 验证抗体的特异性及浓度，必要时更换抗体。

3. 确保孵育条件符合说明书要求。

4. 仔细执行封闭步骤，如果封闭不充分，尝试增加封闭时间或调整封闭液的浓度。

5. 确认显色时间，确保样本孔达到显色的峰值。

6. 使用正确的终止液，并在加入终止液后立即读数。

7. 检查显色剂的保存条件，确保其未被氧化。

8. 核对酶标仪的设置，确保波长和滤光片选择正确，并考虑仪器校准。

9. 如果是新试剂或新操作，可以尝试对照标准品操作，看是否能重现显色，从而排除操作步骤中的问题。

通过上述步骤，可以排查并解决样本不显色的问题。