苯丙氨酸解氨酶（PAL）检测试剂盒（苯丙氨酸比色法）

苯丙氨酸解氨酶（PAL）检测试剂盒（苯丙氨酸比色法）

产品货号：BA1566

产品规格：50T

产品简介：

苯丙氨酸解氨酶( L－phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶，该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加，在多数情况下在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这

时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关，测定细胞木质素合成途径中间代谢物及关键酶活性，可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

尚宝苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒(苯丙氨酸比色法)测原理是以苯丙氨酸作为底物，在酶促反应的件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于分光光度计290nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算，该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的苯丙氨酸解氨酶活性，尤其适用于检测水果中苯丙氨酸解氨酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成

自备材料：

1. 蒸馏水

2. 研钵或匀浆器

3. 离心管或试管

4. 低温离心机

5. 水浴锅或恒温箱

6. 比色杯

7. 分光光度计

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 准备样品：

①植物样品：取2g植物组织或水果中层果肉，加入5ml PAL Lysis buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000g离心15~20min，取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。

2. PAL加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测能设置2平行管，求平均值。

3. PAL测定：以对照管为对照(调零)，比色杯光径1.0cm，分光光度计立即测定290nm处测定管的吸光度(记为A_{测定 0} )。40℃准确孵育1h，立即加入0.1ml PAL终止液终止反应(备选方案)，以对照管为对照(调零)，分光光度计立即测定 290nm处测定管的吸光度(记为A_测定1 )。注意：加入PAL终止液终止反应不是必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照管为对照(调零)，比色杯光径1.0cm，分光光度计立即测定290nm处测定管的吸光度(记为A_测定1 )。

计算：

PAL活性单位的定义：在该实验条件下，每小时吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。

组织样品PAL(U)={(A_测定1 -A_测定0 )×V _T }/(W×V_S ×0.01×t)

式中：A_测定1 =40℃孵育1h后测定管的吸光度

A_测定0 =加入PAL Assay buffer后立即检测的测定管吸光度

W=组织样本的重量(g)

V_T =提取酶液的总体积(ml)

V_S =测定时所用酶液体积(ml)

t=反应时间(h)=1

液体样品PAL(U)=(A_测定1-A_测定0 )/(0.01×t)

式中：A_测定1 =40℃孵育1h后测定管的吸光度

A_测定0 =加入PAL Assay buffer后立即检测的测定管吸光度

t=反应时间(h)=1

注意事项 ：

1. 待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2. 获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20℃保存。

3. 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应注意酶标仪的检测体积。

4. 每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。