谷胱甘肽（GSH）检测助力肺癌治疗研究

背景介绍

谷胱甘肽（GSH）是细胞内重要的抗氧化剂，其水平高低直接反映肿瘤细胞的氧化还原状态。肺癌细胞常依赖高 GSH 水平抵御放化疗产生的活性氧（ROS），引发治疗抵抗。GSH 作为谷胱甘肽过氧化物酶 4（GPX4）的辅因子，能抑制铁死亡，而其消耗会致使 GPX4 失活，进而促进铁死亡，因此 GSH 水平变化是铁死亡的重要标志。动态检测GSH，可评估治疗是否激活氧化应激与铁死亡通路。此外，检测 GSH 还能验证 GSH 响应性药物释放效率，实现肿瘤特异性激活。

谷胱甘肽检测在治疗肺癌研究中的应用

2025年5月8日，复旦大学药学院陈依婷博士等人在Journal of Nanobiotechnology（IF=10.6）期刊上发表了题为“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitriteaugmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer”的研究论文。研究团队设计了一种基于多不饱和脂肪酸（PUFA）的纳米反应器 DHA-N@M，通过吸入给药方式作用于肺部肿瘤。该纳米反应器由巨噬细胞膜包裹 DHA-SNO（一种 GSH 响应性释放NO的 PUFA 衍生物）构成，兼具肿瘤靶向性与 GSH 响应特性。实验显示，DHA-N@M 可显著提升药物在肺肿瘤中的蓄积量，效果优于静脉注射。其作用机制为：通过消耗GSH、释放NO并生成ONOO?，诱导肿瘤细胞铁死亡，与放疗联用可协同增强抗肿瘤效应。在肺癌原位模型中，DHA-N@M 联合放疗展现出 93.91% 的肿瘤抑制率，且安全性良好。该研究为肺癌治疗提供了一种新型吸入式纳米药物递送系统，通过靶向肿瘤微环境和增强铁死亡，显著提升了放疗效果，具有重要的临床转化潜力。

图3 不同处理后Lewis肺癌细胞（E）NO、（F）NOS和（G）ONOO的CLSM图像

接下来，小爱给大家详细介绍谷胱甘肽检测试剂盒（abs580006）的使用方法。

一、试剂盒组分

二、操作步骤

1、材料和试剂准备

自备材料：酶标仪、蒸馏水、移液器与枪头、研钵、离心机、计时器、湿冰等。

Standard：使用前将0.65 mL蒸馏水加入管中，混匀至wan全溶解；然后取0.05 mL溶液加入0.95 mL蒸馏水中混合均匀，获得浓度为0.5 mmo/L的标准品溶液，4°C储存。

Standard：Dye Reagent：使用前加入4 mL Diluent 溶解。

2、样本处理

（1）细胞/细菌样本：将细胞/细菌（5×106）收集到离心管中，离心后去掉上清液，加入1mL Assay buffer，超声处理（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）后于4℃，8000g 离心10 min，上清液转移至新离心管中，湿冰上保存待检测。

（2）组织样本：称取0.1g组织，加入1mL Assay buffer在湿冰上匀浆，4℃，8000g 离心10 min，上清液转移至新离心管中，湿冰上保存待检测。

（3）血清/血浆样本：直接检测。

3、上样及检测

上样前将所有试剂加热至37℃，然后按照如下表格加样。

注：

（1）对于标准品，可进行2倍连续稀释（6个点左右），制成标准曲线。

（2）对于未知的样品，我们建议挑选几个样品进行预实验，以确定样品浓度和稀释倍数。

4、标准曲线

标准曲线仅用于参考，每次实验都必须做一条新的标准曲线。

检测范围：0.01 mmol/L - 0.5 mmol/L

常见问题解答

Q1：试剂盒中的96-Well Microplate只有一个，不够实验使用怎么办？
A1：该试剂盒中的96孔板是免费送的，后续实验可以用常规的96孔酶标板代替。

Q2：试剂盒操作说明书中既有标准曲线法又有公式法，我应该选择哪种计算方式？
A2：两种方式任选一种就可以，公式是简便算法，建议按照标曲计算，会更加准确。需要注意的是，使用标准曲线法，每次实验必须重新绘制标准曲线。

Q3：反应过程中出现沉淀，应该如何处理？
A3：沉淀或絮状物大多是因为蛋白质浓度过高导致的，建议把样品从孔板里吸出来离心一下取上清再去检测，或者把样品加到离心管里反应离心后再取上清加到孔板里检测。

Q4：仪器无相应检测波长怎么办？
A4：试剂盒里推荐的检测波长如果仪器设置里没有，可以在说明书推荐检测波长附近找，在±10nm以内一般是没有问题的。

参考文献:
[1]Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology. 2025;23(1):338. Published 2025 May 8. doi:10.1186/s12951-025-03409-8

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