AGS细胞常见问题：贴壁性差、污染与异常增殖的处理

来源：上海乾思生物科技有限公司 2025年07月17日 09:38

　　AGS细胞常见问题及处理策略

　　AGS细胞（人胃腺癌细胞）在培养过程中易出现贴壁性差、污染及异常增殖等问题，需针对性优化操作流程与环境控制，以保障细胞正常生长与实验可靠性。

　　一、贴壁性差：优化培养条件与操作细节

　　培养基与血清适配性

　　确认使用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM或RPMI-1640培养基，血清需经56℃灭活30分钟以去除补体干扰。若细胞仍贴壁不佳，可尝试添加0.1%ECM胶（如Matrigel）预涂培养瓶，增强细胞黏附。

　　避免频繁更换血清品牌，防止因成分差异导致细胞适应不良。

　　传代操作规范

　　消化时使用0.25%胰酶-EDTA，37℃孵育1-2分钟，待细胞变圆后立即终止消化（加入2倍体积培养基），避免过度消化损伤细胞膜。

　　传代密度控制在1:3至1:4，过低密度（如<1:6）易导致细胞接触抑制失效，贴壁能力下降。

　　培养环境稳定

　　维持37℃、5%CO?、饱和湿度条件，避免温度波动（如频繁开关培养箱）或气体浓度异常（如CO?浓度>6%）影响细胞代谢。

　　二、污染：严格无菌操作与早期干预

　　细菌/真菌污染

　　观察培养基浑浊度、pH变化（黄色变紫）及细胞形态（如颗粒增多、崩解），若怀疑污染，立即丢弃细胞并底消毒超净台（75%酒精擦拭+紫外线照射30分钟）。

　　培养基中添加1%双抗（青霉素-链霉素）作为预防，但长期使用可能筛选耐药菌，建议仅在污染高发期使用。

　　支原体污染

　　定期检测（如PCR法或荧光染色法），若阳性则用5-10μg/mLBM-Cyclin处理2-3周，同时更换所有培养用品（包括培养基、血清、枪头）。

　　三、异常增殖：控制传代周期与密度

　　过密生长抑制

　　当细胞融合度达80%-90%时及时传代，避免接触抑制失效导致细胞堆叠、形态异常（如多核化）。

　　若细胞已堆叠，可用0.02%EDTA短暂处理（1-2分钟）分散细胞团，再重新铺板。

　　遗传漂变干预

　　每10-15代冻存一支原始细胞株，避免长期培养导致基因型漂移（如增殖速度加快、药物敏感性改变）。

　　若细胞出现自发转化（如形成克隆岛、接触抑制消失），建议更换新复苏的细胞株。

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