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总胆固醇(TC)含量检测试剂盒说明书

来源:上海研谨生物科技有限公司   2025年07月03日 10:10  

总胆固醇(TC)含量检测试剂盒说明书

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格:100T/96S 产品简介:

微量法

总胆固醇(Total Cholesterol,TC)是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和,包括游离胆固醇和胆固醇酯。

利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为 FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化,生成△4-胆甾烯酮和 H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物,其在 500nm 有特征吸收峰,其颜色深浅与TC 含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、

EP 管、蒸馏水、异丙醇。产品内容:

提取液:异丙醇 100mL×1 瓶,自备,4℃保存;

工作液:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:粉剂×1支,10mg胆固醇,4℃保存。临用前加入517μL提取液,振荡溶解,即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液。

操作步骤:

一、样本处理:

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL

提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 2 秒,间隔 3 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。

3.血清(浆)样品:直接测定。二、测定步骤:

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。

2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表:(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)

第 1 页 共 2 页

测定管标准管空白管

样品(µL)20--

标准溶液(μL)-20-

提取液(μL)--20

工作液(µL)180180180

充分混匀,37℃静置 15min,反应完成后测定 500nm 处吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管,△A=A 测定管-A 空白管,△A 标准=A 标准管-A 空白管, 空白管只需测一次。

总胆固醇含量计算

一、标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的△A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b, 将△A 带入方程得到 x(μmol/mL)

二、总胆固醇含量的计算:

1.血清(浆)中 FC 含量计算:

TC 含量(μmol/dL)=x×100。

2.组织中 FC 含量计算:

1.按样本蛋白浓度计算

TC 含量(μmol/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提取)=x÷Cpr。

2.按样本鲜重计算

TC 含量(μmol/g 鲜重)=x×V 提取÷W= x÷W

3.细胞、细菌中 TC 含量计算:

TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。

100:1dL=100mL;V 提取:加入样本的提取液体积,1mL;W:样本质量,g;500:500 万个细胞数量。

注意事项

当△A 大于 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

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