ATP 含量检测试剂盒说明书

ATP 含量检测试剂盒说明书

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

  货号：

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系技术人员。

微量法

试剂名称规格保存条件

提取液液体 100 mL×1 瓶4℃保存

试剂一液体 20 mL×1 瓶4℃保存

试剂二粉剂×1 瓶4℃保存

试剂三液体 4 mL×1 瓶4℃保存

试剂四粉剂×2 支-20℃保存

试剂五粉剂×1 瓶4℃保存

试剂六粉剂×2 支-20℃保存

标准品粉剂×1 支-20℃保存

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 3.5 mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；

2、 试剂四：临用前取 1 支加入 0.2 mL 蒸馏水溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

3、 试剂五：临用前加入 1 mL 蒸馏水；

4、 试剂六：临用前取 1 支加入 0.25 mL 蒸馏水备用，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

5、 标准品：5 mg ATP。临用前加入 0.826 mL 蒸馏水配成 10 μmol/mL 的 ATP 标准溶液；

6、 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=1：1：0.1：

0.4：0.1 的比例配制，现配现用。

产品说明：

ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH， NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，NADPH 和 ATP 含量成正比，以此反应 ATP 含量。

技术指标：

最低检出限：0.0026 μmol/mL

线性范围：0.01953-3 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水和氯

仿。

操作步骤：

一、样本处理

1、 血清（浆）中 ATP  的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约

0.1mL 血清（浆），加入 1mL  提取液），充分震荡，10000g，4℃离心 10min；取上清液至另一 EP  管中，加入

500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、 组织中 ATP  的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g  组织，加入

1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP  管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3、 细胞或细菌中 ATP  的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104  个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎 1min（冰浴，强度 20％或 200W，超声 2s，停 1s），10000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。

2、 将 10μmol/mL 的 ATP 标准溶液用蒸馏水稀释 16 倍即 0.625μmol/mL 标准溶液备用。

3、 加样表：在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入

试剂名称(μL)测定管标准管

样本20

标准液20

试剂一128128

工作液5252

充分混合后，立即测定 340nm 下 10s 的吸光值 A1，然后将比色皿连同反应液一起放入 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴中反应 3min，拿出擦拭干净立即测定其在 3min10s 时的吸光值 A2。用96 孔板则放入 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）培养箱中（酶标仪若自带控温功能，则将温度调

至 37℃或 25℃）。分别计算ΔA 测定=A2 测定管-A1 测定管，ΔA 标准=A2 标准管-A1 标准管。

三、ATP 含量计算

1、 血清（浆）中 ATP 含量计算

ATP  含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×（V 提取+V 血清（浆））÷V 血清（浆）

=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准

2、 组织、细菌或细胞中 ATP 含量计算

（1）按样本质量计算

ATP 含量（μmol/g 质量）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷W

=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

（2）按细菌或细胞数量计算

ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷5

=0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准

C 标准：标准液浓度，0.625μmol/mL；V 提取：加入的提取液体积，1mL；V 血清（血浆）：血清（浆）体积，

0.1mL；W：样本质量，g；5：细胞或细菌总数，5×106 个。

注意事项：

1、 加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。

2、 提取过程严格在冰浴条件下进行。

3、 如果吸光值大于 1.5，建议将样本用提取液稀释后进行测定。

4、 提取液低温条件下，可能有结晶析，放于 60℃水浴溶解即可，不影响使用。

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