小鼠转录因子T-bet(T-bet)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!本生试剂盒

　　?小鼠转录因子T-bet(T-bet)ELISA试剂盒实验使用说明书主要包括以下内容?：

　　货号：BS-9406 小鼠转录因子T-bet(T-bet)ELISA试剂盒

　　一、实验准备

　　?试剂盒保存与平衡?：试剂盒应保存在2-8℃条件下，使用前需室温平衡20分钟?。

　　?实验器材准备?：准备必要的实验器材，如酶标仪(450nm)、高精度加样器及枪头、37℃恒温箱等?。

　　二、样本收集与处理

　　?血清?：使用不含热原和内毒素的试管收集血液，3000转离心10分钟分离血清和红细胞?。

　　?血浆?：采用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清?。

　　?细胞上清液?：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物?1。

　　?组织匀浆?：将组织加入适量生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清。若样本不及时检测，应按一次用量分装并冻存于-20℃?。

　　三、实验步骤

　　?加样?：

　　在酶标包被板上设定标准品孔、待测样品孔和空白孔。

　　标准品设定5个浓度点，每个浓度设定平行孔，加入50微升不同浓度的标准品。

　　待测样品孔先加样品稀释液40微升，再加待测样品10微升(最终稀释度为5倍)。

　　空白孔加入50微升蒸馏水?。

　　?温育?：用封板膜封板后置37℃温育30分钟?。

　　?配液?：将浓缩洗涤液按倍数稀释后备用?。

　　?洗涤?：揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干?。

　　?加酶?：每孔(除空白孔外)加入酶标试剂50微升?。

　　?再次温育?：操作同第一次温育步骤?。

　　?再次洗涤?：操作同洗涤步骤?。

　　?显色?：每孔先加入显色剂A50微升，再加入显色剂B50微升，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟?。

　　?终止?：每孔加终止液50微升，终止反应(颜色由蓝转黄)?。

　　?测定?：以空白孔调零，在450nm波长下依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行?。

　　四、注意事项

　　试剂盒仅用于科学研究，不得用于医学诊断?。

　　实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封并低温干燥保存?。

　　严格按照说明书操作，避免交叉污染和试剂浪费?3。

　　五、实验室自备器材试剂

　　96孔读板仪器

　　自动洗板机

　　移液器和枪头(建议使用多通道移液器/排枪)

　　Eppendorf管

　　洗板缓冲液(如neutral PBS或TBS，试剂盒内提供足量，如需额外缓冲液可参考配方配制)?4请按照说明书严格操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。