25ug/支 微型高效氯霉素免疫亲和纯化富集柱

微型高效氯霉素免疫亲和纯化富集柱

使用说明书

用途                                                                         

我所通过合作，应用*进技术研制的微型高效氯霉素免疫亲和纯化富集柱（号：2013091200151300）性能稳定、可以重复使用(*次使用回收率101.3%，第二次回收率达到96%，第三次回收率达62%)；吸附容量大（如氯霉素达到52.72ug/ml,）；吸附灵敏度（zui低富集）达到0.1ng/ml。

此免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的氯霉素，从而对氯霉素样品起到特异性纯化和富集的作用。样品过柱后的洗脱液既可结合ELISA测试盒或胶体金试纸条进行检测，也可联合液相色谱进行精确定量。亲和柱的使用可以改善信噪比，提高检测方法的准确度。

氯霉素                                                             

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种广谱抗生素。医学临床和兽医曾用来治疗人及动物的多种感染性疾病。但氯霉素有严重的毒副作用，已被临床医学和动物生产上禁止使用。但仍存在屡禁不止的情况，食品中氯霉素的残留严重危害人体健康。

富集原理                                                           

亲和柱富集的原理是抗原抗体的特异性反应。样品经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过氯霉素免疫亲和柱，样品中的氯霉素与偶联在琼脂糖珠上的抗体结合，洗涤掉杂质后，根据后续检测需要选用洗脱液洗脱，收集的洗脱液可以用于仪器分析，或用于免疫学检测方法检测。

产品包装组成                                                       

注意事项                                                           

1．亲和柱在不使用时，需放置在-20℃保存，其他试剂放在2-8℃保存，并确保在有效期内使用。

2．柱子的填料应保持湿润，在保存、清洗、上样、洗脱的过程中不能出现填料干燥的情况。

3．在操作中，填料里尽量不要有气泡，以免影响流速。

4．实验完后需对所用材料、容器、设备做适当处理。

5．洗脱液里的乙酸容易挥发，请密封保存；若乙酸挥发完，不能使用，需要重新配制。

样品处理                                                           

牛奶样品：称取牛奶样品5g(精确至0.01g),置于50mL塑料离心管中，加入适量的氯霉素氘代内标（氯霉素-D5）和乙腈30mL,匀浆，离心5min。将上清液移250mL的分液漏斗中，加入15mL的乙腈饱和的正己烷，振荡5min，静置分层，转移乙腈层至100mL的棕色心形瓶中，残渣中再加入30 mL的乙腈，振摇3min，离心5min，取上清液转移到同一分液漏斗中，振荡5min，静置分层，转移乙腈层至棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5mL正丙醇，于40度水浴中旋转蒸发近干，用氮气吹干，分次加入15mL PBS溶解,全部转移至离心管中，待亲和柱净化。

组织样品：将样品捣碎，取5.0 g（精确到1mg）于50 mL离心管中并加入20 mL乙酸乙酯，充分混匀后放入离心机5000 r/min离心10 min，取10 mL上清液于45℃下氮气吹干，吹干后残留物用10 mL的甲醇-水（10:90）溶解后,于4000 r/min离心5 min，并用定性滤纸过滤。收集滤液，用饱和Tris调节PH=7.0±0.5，待亲和柱净化。

饲料样品：称取一定量的试样（配合饲料5.00 g，预混合饲料1.00 g），置于50mL塑料离心管中，加入40 mL乙酸乙酯，盖好密封盖于涡旋混合器上混合2min，超声波提取器提取20min，期间用手摇动两次，离心机4000 r/min离心4 min，取上清液20mL，于50℃加热器上用氮气吹至近干，残留物用10 mL的甲醇-水（10:90）溶解后,于4000 r/min离心5 min，并用定性滤纸过滤。收集滤液，用饱和Tris调节PH=7.0±0.5，待亲和柱净化。

操作程序                                                           

1．自冰箱取出免疫亲和柱，在室温（22～25℃）平衡10 min，将上方塞和下方塞子取出。上方接上已经去掉活塞的注射器。亲和柱内含有甘油作为保护剂，使用时应该将上方的甘油全部吸取出来。

2．清洗①：将亲和柱固定好，往注射器内加入1 mL PBS，用活塞从注射器上方轻轻按压，使PBS匀速流出，但不要*挤压出PBS，注意保持柱内填料含有液体。

3．上样：准确量取5mL（上样量可以根据实际情况做调整）处理后的样品液于注射器内，用活塞加压控制流速为1滴/2 s，弃去流出液。样液过柱的方式有：自然流淌、手动加压（产品配备的注射器）、真空泵抽滤。可根据实际情况需要选择不同的过柱方式。

4．清洗②： 待样品滴净后，依次加入2 mL PBSt、2 mL PBS清洗。洗法同清洗①。

5．去掉注射器，根据后续检测需要，选择洗脱液A或洗脱液B其中的一种，加入0.2 mL（洗脱液总量可以根据实际情况作调整），洗脱液自然滴下，用EP管接收洗脱液（接洗脱液时，流出*滴洗脱液不要）。

6．将收集到的洗脱液转入仪器分析或采用ELISA/胶体金检测（用作ELISA/胶体金的收集液必须用饱和Tris调节PH=7.0±0.5）。

7．保质期一年。

再生使用方法：依次用0.2mL的PBSt、1mL的PBS清洗亲和柱，直到流出来的清洗液PH值为7左右，zui后用0.2ml的甘油保存。本微型高效免疫亲和纯化富集柱经过再生处理后可以重复使用多次。