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药品质量检测方法：柱色谱法
2022年08月24日 15:24:14
来源：Ky开元集团 作者：小王 点击量：5379
柱色谱法是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术，用来分离大多数有机化合物，尤其适合于复杂的天然产物的分离。柱色谱法分离容量能从几毫克到百毫克级，所以，适用于分离和精制较大量的样品。而柱色谱法细分又可以分成吸附柱色谱和分配柱色谱两种。
【化工仪器网 行业百态】柱色谱法是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术，用来分离大多数有机化合物，尤其适合于复杂的天然产物的分离。柱色谱法分离容量能从几毫克到百毫克级，所以，适用于分离和精制较大量的样品。而柱色谱法细分又可以分成吸附柱色谱和分配柱色谱两种。
吸附柱色谱的色谱柱为内径均匀、下端(带或不带活塞)缩口的硬质玻璃管，端口或活塞上部铺垫适量棉花或玻璃纤维，管内装入颗粒应尽可能大小均匀的吸附剂(颗粒直径若没有特殊规定，一般采用 0.07~0.15mm)。色谱柱的大小，吸附剂的品种和用量，以及洗脱时的流速，均按各品种项下的规定进行选择。
在吸附柱色谱中，吸附剂是固定相，洗脱剂是流动相，基于各组分与吸附剂间存在的吸附强弱差异，通过使之在柱色谱上反复进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程，完成分离。因此，吸附柱色谱吸附剂的填充是一个非常重要的环节。
一般来说，吸附剂的填装分为干法和湿法两种。干法是将吸附剂一次加入色谱柱，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入洗脱剂。若色谱柱本身不带活塞，可在色谱柱下端出口处连接活塞，加入适量的洗脱剂，旋开活塞使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
湿法是先将吸附剂与洗脱剂混合，搅拌除去空气泡后，再徐徐倾入色谱柱中，然后加入洗脱剂将附着在管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。俟填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下，至液面和柱表面相平时，即加供试品溶液。
加入供试品时也需要注意，除另有规定外，应先将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中，再沿管壁缓缓加入，并且不能使吸附剂翻起。也可将供试品溶于适当的溶剂中与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽使呈松散状，加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常用溶剂中不溶，可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
洗脱同样不能马虎。除另有规定外，通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比例，分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂的品种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
分配柱色谱的操作方法与吸附柱色谱基本一致。不顾偶需要注意的是，装柱前，应先将固定液溶于适当溶剂中，加入适宜载体，混合均匀，待溶剂完全挥干后分次移入色谱柱中并用带有平面的玻棒压紧。供试品可溶于固定液，混以少量载体，加在预制好的色谱柱上端。洗脱剂需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中固定液的流失。
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