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药品质量检测方法：荧光分光光度法
2022年08月24日 10:35:53
来源：Ky开元集团 点击量：6849
荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。
【化工仪器网 行业百态】荧光是指物质分子在激发态最低振动能级返回到基态各振动能级时所发出来的光，比激发光波长更长。荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。当激发光强度、波长、所用溶剂和温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用于该物质的含量测定。
由于不同的物质其组成与结构不同，所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长也不同，同一种物质应具有相同的激发光谱和荧光光谱，将未知物的激发光谱和荧光光谱图的形状、位置与标准物质的光谱图进行比较，即可对其进行定性分析。如果该物质的浓度不同，它所发射的荧光强度就不同，测量物质的荧光强度可对其进行定量测定。
荧光分光光度法的特点是灵敏度高、选择性好、样品用量少和操作简便，常用于微量甚至痕量毒物的定量分析。其灵敏度一般较紫外-可见分光光度法高，但浓度太高的溶液会发生“自熄灭”现象，而且在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分光光度法应在低浓度溶液中进行。在卫生检验、环境及食品分析、药物分析、生化和临床检测等方面有着广泛的应用。
测定法
荧光分光光度法所用的仪器为荧光计或荧光分光光度计，按各品种项下的规定，选定激发光波长和发射光波长，并制备对照品溶液和供试品溶液。
通常荧光分光光度法是在一定条件下，测定对照品溶液荧光强度与其浓度的线性关系。当线性关系良好时，可在每次测定前，用一定浓度的对照品溶液校正仪器的灵敏度。然后在相同的条件下，分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光强度与供试品溶液及其试剂空白的荧光强度，并用下式计算供试品浓度：
式中，Cx为供试品溶液的浓度，Cr为对照品溶液的浓度，Rx为供试品溶液的荧光强度，Rxb为供试品溶液试剂空白的荧光强度，Rr为对照品溶液的荧光强度，Rrb为对照品溶液试剂空白的荧光强度。
且因荧光分光光度法中的浓度与荧光强度的线性范围较窄，故(Rx-Rxb)/(Rr-Rrb)应控制在0.5～2之间为宜，如若超过，应在调节溶液浓度后再进行测定。需要注意的是，当浓度与荧光强度的关系明显偏离线性范围时，应改用标准曲线法进行含量测定。
对易被光分解或弛豫时间较长的品种，为使仪器灵敏度定标准确，避免因激发光多次照射而影响荧光强度，可选择一种激发光和发射光波长与供试品近似而对光稳定的物质配成适当浓度的溶液，作为基准溶液。例如蓝色荧光可用硫酸奎宁的稀硫酸溶液，黄绿色荧光可用荧光素钠水溶液，红色荧光可用罗丹明B水溶液等。在测定供试品溶液时选择适当的基准溶液代替对照品溶液校正仪器的灵敏度。
【附注】
荧光分光光度法因灵敏度高，故应注意以下干扰因素。
(1)溶剂不纯会带入较大误差，应先做空白检查，必要时，应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏后再用。
(2)溶液中的悬浮物对光有散射作用，必要时，应用垂熔玻璃滤器滤过或用离心法除去。
(3)所用的玻璃仪器与测定池等也必须保持高度洁净。
(4)温度对荧光强度有较大的影响，测定时应控制温度一致。
(5)溶液中的溶氧有降低荧光作用，必要时可在测定前通入惰性气体除氧。
测定时需注意溶液的pH值和试剂的纯度等对荧光强度的影响。
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